■ 基本信息
啟動子: | CMV |
復(fù)制子: | pUC |
終止子: | HSV TK poly(A) signal |
質(zhì)粒分類: | 哺乳細(xì)胞質(zhì)粒；哺乳編輯質(zhì)粒；干擾RNA質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 5759bp |
原核抗性: | Str |
真核抗性: | Blast |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37℃，有氧，5%CO2 |
表達(dá)宿主: | 293T等哺乳細(xì)胞 |
誘導(dǎo)方式: | 無需誘導(dǎo) |
5'測序引物: | pEGFP-C-5 |
3'測序引物: | HSVtk-pA-R：GTCTCCTTCCGTGTTTCAG |
備注: | 可連入miRNA片段 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 哺乳細(xì)胞 |
質(zhì)粒用途: | 轉(zhuǎn)錄調(diào)控 |
片段類型: | miRNA
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片段物種: |
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原核抗性: | Str |
真核抗性: | Blast
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熒光標(biāo)記: | 綠色
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■ 質(zhì)粒簡介
pCDNA6.2-GW-EmGFP-miR-Control質(zhì)粒是在pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR線性化載體的基礎(chǔ)上連入了一個小片段而成。如果需要連入其它miRNA片段，可通過引物退火加酶切連接的方式連入。 轉(zhuǎn)染后可立即表達(dá) miRNA。 所表達(dá)的 miRNA 在核內(nèi)經(jīng)內(nèi)源細(xì)胞機(jī)制（包括 Drosha 酶）加工后，轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)，由 Dicer 酶進(jìn)一步加工）。 然后，完成加工的 miRNA 結(jié)合到 RISC，在此處其功能類似于 siRNA，使 mRNA 靶標(biāo)被切割。
帶有 EmGFP 的 BLOCK-iT? Pol II miR RNAi 表達(dá)載體試劑盒將傳統(tǒng) RNAi 載體的優(yōu)點(diǎn)（表達(dá)穩(wěn)定并能夠使用病毒導(dǎo)入）以及組織特異性表達(dá)和同一轉(zhuǎn)錄本多靶點(diǎn)抑制的功能集于一身。 帶有 EmGFP 的 BLOCK-iT? Pol II miR RNAi 表達(dá)載體試劑盒含有的 pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR 載體設(shè)計用于表達(dá)人工 miRNA，該 miRNA 經(jīng)工程化改造，與目的基因序列有 100% 的同源性并能引起靶標(biāo)分子的切割。 該載體包括內(nèi)源性 miRNA 的側(cè)翼序列和環(huán)序列，內(nèi)源性 miRNA 可指導(dǎo)從較長的 Pol II 轉(zhuǎn)錄本 (pre-miRNA) 上切除工程化的 miRNA。 使用 一流的 BLOCK-iT RNAi Designer，超過 70% 的重組體能產(chǎn)生超過 70% 的抑制效率。 工程化 miRNA 的 Pol II 表達(dá)可實(shí)現(xiàn)：
在 CMV 即刻早期啟動子作用下高效表達(dá)，可通過 MultiSite Gateway重組選擇組織特異性啟動子和其它受調(diào)控的啟動子；
在 pcDNA?6.2-GW/EmGFP-miR 載體中同-順反子表達(dá) Emerald GFP (EmGFP) 報告基因，使 EmGFP 的表達(dá)與目的 miRNA 抑制活性之間具有極強(qiáng)的相關(guān)性；
與用于基因表達(dá)的多種 Invitrogen Gateway? 目的 (DEST) 載體兼容；包括用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)分裂細(xì)胞、非分裂細(xì)胞和原代細(xì)胞類型的慢病毒載體，用于染色體單位點(diǎn)整合的 Flp-In? 系統(tǒng)，以及替代報告基因融合構(gòu)建體；
可在同一轉(zhuǎn)錄本表達(dá)的工程化 miRNA 多于一種，從而可同時抑制多個基因并產(chǎn)生合成表型；
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請下載：
ZK561pCDNA6.2-GWEmGFP-miR-Control哺乳調(diào)控質(zhì)粒.txt
